Extracción de ADN

 

Extracción de ADN Cromosomal

VIDEO 1: Extracción de ADN (fundamento, métodos y organelos)

VIDEO 2: Extracción y purificación del ADN

Protocolo para la extracción de ADN cromosómico bacteriano.

1. Inocule una colonia de E. coli de un plato de agar LB, en 2.5 mL de caldo LB e incube durante toda la noche a 37°C.
2. Colecte por centrifugación por 3 min a  12000 rpm en un tubo eppendorf.
3. Suspenda el pellet en 200 uL de solución de lisis (Tris-EDTA-SDS).
4. Para remover la mayoría de las proteínas y debris de bacterias, añada 66 uL de 5M de NaCl y mezcle bien.
5. Centrifugue a 12000 rpm por 10 min a 4°C. 
6. Transfiera el sobrenadante a un tubo nuevo con igual volumen de cloroformo. Mezcle en vortex hasta que se forme una solución lechosa.
7. Centrifugue a 12000 rpm por 3 min. Extraiga el sobrenadante y precipite el ADN añadiendo etanol frío (alcohol absoluto) o isopropanol al 100%, el doble del volumen de sobrenadante recuperado.
8. Centrifugue nuevamente a 12000 rpm por 3 min. Elimine el sobrenadante. Lave el pellet dos veces con etanol al 70% y seque el pellet.
9. Disuelva en aproximadamente 25-50 uL de buffer TE.

MATERIAL SUPLEMENTARIO

https://askabiologist.asu.edu/alkaline-lysis